目的：關節(jié)軟骨作為承重表面，其特征在于非均質性和多帶狀組織。頂層是關節(jié)軟骨的第一個受累區(qū)，這是由于骨關節(jié)炎等退行性疾病的結果。壓痕實驗能夠確定軟骨表層的位點依賴性（粘性）彈性特性。我們已經(jīng)建立了一種可重復的微壓痕方法來測量大鼠膝關節(jié)軟骨的表層剛度，并確定一個膝關節(jié)隔室內，內側和側隔室之間，一只動物的左膝蓋和右膝蓋之間以及動物之間的空間變化。

方法：使用帶有球形壓頭的位移控制納米壓頭機（荷蘭Piuma）（Optics11）在大鼠脛骨樣品（Harlan，Wistar，男性，12周齡）上獲得基于壓痕的力 - 位移曲線。將樣品附著在底物上，并用補充蛋白酶抑制劑的PBS溶液覆蓋（德國羅氏）。應用了不同的探頭尺寸（范圍50-150微米）和壓痕深度（范圍4-12微米），并在900×900μm的區(qū)域內測試了多個壓痕的再現(xiàn)性（圖1）。軟骨的有效彈性模量是基于Oliver-Pharr理論計算的，用于具有球形壓頭的壓痕。

結果：實驗的再現(xiàn)性，在同一位置的不同時間點應用單個壓痕，僅發(fā)現(xiàn)5%的變化。然而，在900x900μm區(qū)域內軟骨硬度的空間變化是巨大的，高達20倍的變化（圖2）。因此，需要至少一系列144個壓痕（12×12網(wǎng)格，點與點之間的距離為82μm）才能在該區(qū)域上找到可重現(xiàn)的剛度圖，并為該區(qū)域提供可重現(xiàn)的平均值。對于所有動物，膝蓋的側隔室比內側隔室硬得多（表1，P值<0.01）。此外，我們還發(fā)現(xiàn)動物之間的有效模量存在相當大的差異，并且每種動物內左右膝關節(jié)模量之間的變異性甚至更高（表2，P值<0.001）。